? 冰凍切片是指將組織在冷凍狀態(tài)下直接切片。
? 在切片前組織不經(jīng)過任何化學(xué)藥品處理或加熱過程。
– 縮短了制片時(shí)間
– 抗原性不受損失
? 對(duì)穩(wěn)定性差的抗原，如淋巴細(xì)胞表面抗原尤其適合。
? 組織凍結(jié)過程中，細(xì)胞內(nèi)、外的水分會(huì)形成冰晶，凍結(jié)的速度愈慢，冰晶顆粒愈大，可嚴(yán)重影響組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。因此制備凍塊時(shí)要求低溫、速凍。
1、冰凍組織塊的常用方法
? 液氮中冰凍：組織投入液氮中 (一196?C)中10～20sec；
? 干冰中加入丙酮(或異戊烷)，液體立即氣化起泡，溫度降至一70?C ，將組織投入，若在干冰丙酮中置一盛有異戊烷的容器，組織投入該容器內(nèi)結(jié)凍則更好；
– 上述組織在速凍時(shí)應(yīng)浸埋于OCT包埋劑或甲基纖維素糊狀液內(nèi)，以保護(hù)組織。
– 制成凍塊后若需保存，應(yīng)以鋁箔或塑料薄膜封包，貯存于-70 ?C冰箱。
2、切片
? 供免疫組化用的冰凍切片同樣要求附貼平整，并有連續(xù)性。
? 載玻片也應(yīng)清潔無油污，但一般無需涂抹粘附劑；
? 切片時(shí)，使用恒溫冷凍切片機(jī)，在箱內(nèi)溫度-25 ?C 。切片厚度一般為4～8?m。
3、切片后處理
? 切好的冰凍切片，室溫下自然晾干1～2h后，入4?C丙酮固定10min，待干燥后作免疫組化染色或封存于-20℃。細(xì)胞
? 由于切片技術(shù)要求較高，不易得到連續(xù)性很好的切片，其形態(tài)結(jié)構(gòu)亦不如石蠟片，且凍塊和切片不便于長(zhǎng)期貯存，因此的應(yīng)用受限。
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